FISH
La FISH es una tecnología reciente que utiliza sondas de DNA marcadas con un fluoróforo para detectar o confirmar anomalías génicas o cromosómicas que generalmente están más allá de la capacidad de resolución de la citogenética de rutina. En primer lugar, la muestra de DNA (cromosomas metafásicos o núcleos en interfase) se desnaturaliza, proceso que separa las hebras complementarias de la estructura en doble hélice del DNA. A la muestra desnaturalizada se le añade entonces la sonda de interés, marcada con un fluoróforo, que se asociará al DNA de la muestra en el sitio diana, en el proceso denominado hibridación, donde se vuelve a formar una doble hélice. La señal emitida por la sonda se observa mediante un microscopio de fluorescencia y así la muestra de DNA se puede clasificar según la presencia o ausencia de la señal.
FISH de metafase
La FISH puede usarse sobre células en metafase para detectar microdeleciones específicas más allá de la capacidad de resolución de la citogenética de rutina, o para identificar material extra de origen desconocido. Puede también ser de ayuda en casos donde es difícil determinar mediante la citogenética de rutina si un cromosoma tiene una deleción simple o si está implicado en una reorganización sutil o compleja. Además, la FISH de metafase puede detectar algunos de los reordenamientos específicos que se observan en ciertos tipos de cáncer.
El número de síndromes de microdeleción diagnosticados por FISH está aumentando con rapidez. La sensibilidad de estos ensayos es en todos los casos mejor que la de la citogenética de rutina, pero depende del síndrome en concreto. En algunos, la sonda es específica para el gen defectuoso, como en el Síndrome de Williams, donde el 96% de los pacientes con diagnóstico confirmado poseen una deleción en el gen de la elastina. En otros síndromes como el de Prader-Willi/Angelman, la etiología es heterogénea y las microdeleciones sólo existen en una parte de los casos (60%).
Síndromes de microdeleción actualmente diagnosticables mediante FISH
•Síndrome del maullido (cri-du-chat)
•Síndrome de Kallman
•Síndrome de Miller-Dieker
•Síndrome de Williams
•Síndrome de Smith-Magenis
•Síndrome de Wolf-Hirschhorn
•Deficiencia de esteroide-sulfatasa
•Síndrome de Prader-Willi/Angelman
•Síndrome DiGeorge/Velo-Cardio-Facial/CATCH 22/Shprintzen
Éste es un ejemplo de una célula en metafase que se ha hibridado con la sonda diseñada para detectar el síndrome DiGeorge/Velo-Cardio-Facial/CATCH 22/Shprintzen, causado por una microdeleción en el cromosoma 22. En este caso particular, se emplea una mezcla bicolor de dos sondas distintas para el cromosoma 22. La señal verde es un control interno que hibrida en 22q13. Permite identificar rápidamente los dos cromosomas 22. La señal roja está situada en la región DiGeorge, en 22q11.2. Puesto que ambos cromosomas 22 tienen la señal roja, en esta célula no hay microdeleción en la región DiGeorge y este paciente no tendría el síndrome DiGeorge.
FISH de interfase
La FISH se puede usar sobre células en interfase para determinar el número de copias de uno o varios cromosomas, así como para detectar algunas reorganizaciones específicas que son características de ciertos tipos de cáncer. La ventaja principal de la FISH de interfase es que se puede realizar muy rápidamente si es preciso, normalmente en 24 horas, porque no requiere crecimiento de las células.
Un buen ejemplo es el ensayo de aneuploidía, que se realiza sobre células del fluido amniótico cuando hay una fuerte indicación clínica de una de las trisomías más comunes. Se desnaturalizan los núcleos de la muestra, se hibridan con sondas específicas para los cromosomas 13, 18, 21, X e Y, y habitualmente en 24 horas se dispone de los resultados. La prueba de aneuploidía suele incluir también una citogenética de rutina para confirmar los resultados o detectar cualquier anomalía no detectada por la FISH de interfase.
Éste es un ejemplo de la prueba de aneuploidía, donde se han combinado núcleos en interfase procedentes de células de fluido amniótico con sondas de DNA diseñadas para los cromosomas 13, 18, 21, X e Y. El núcleo de la izquierda se ha hibridado con sondas para los cromosomas 13 (verde) y 21 (rojo). El núcleo de la derecha se ha hibridado con sondas para los cromosomas 18 (azul claro), X (verde) e Y (rojo). Puesto que hay dos señales correspondientes a las sondas de 13, 18 y 21, y una sola señal de cromosomas X e Y, este feto es un varón, normal con respecto a la prueba de aneuploidía.
http://biomodel.uah.es/citogene/dynacare/fishinfo.htm
Estas páginas son traducción de Cytogenetics Information Site
El autor del contenido original es Dave McDonald y las imágenes de ejemplo fueron cedidas por Dynagene Cytogenetics Laboratory (Seattle, WA, U.S.A.)
Traducción al español de Angel Herráez (Univ. de Alcalá)
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